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¿Qué es la cromatografía?
La cromatografía es un método físico de separación basado en la diferencia de distribución de los componentes de una mezcla entre dos fases inmiscibles, una móvil y otra estacionaria.
¿Cómo se retienen las moléculas de soluto en la cromatografía?
Las moléculas de soluto de la mezcla son retenidas por la fase estacionaria y arrastradas por la fase móvil.
¿Qué determina la afinidad de los componentes de la mezcla en cromatografía?
La afinidad viene determinada por fuerzas de tipo Van der Waals, puentes de hidrógeno o transferencia de carga.
¿Qué ocurre con los componentes fuertemente retenidos por la fase estacionaria?
Los componentes que sean fuertemente retenidos por la fase estacionaria se moverán más lentamente a lo largo de dicha fase que aquellos que se unen débilmente.
¿Cómo se separan los componentes de la mezcla?
Como consecuencia de la diferencia de movilidad, los componentes de la mezcla se separan en bandas discretas.
¿Cuáles son algunos usos de la cromatografía?
La cromatografía se utiliza para la separación de mezclas, purificación de productos, determinación del grado de pureza de un compuesto, seguimiento de reacciones, y detección y caracterización de compuestos.
¿Cuál es la principal ventaja de la cromatografía frente a otros métodos de separación?
La principal ventaja de la cromatografía es que esta técnica puede aplicarse a cantidades muy pequeñas de producto, del orden del microgramo.
¿Cómo se pueden clasificar las técnicas cromatográficas?
Las técnicas cromatográficas se pueden clasificar según la naturaleza de las fases, relación de polaridad de las fases, mecanismo de separación, disposición de las fases, y forma de desarrollo del proceso.
¿Qué tipos de cromatografía líquida se estudiarán en la práctica?
Se estudiarán la cromatografía de adsorción en columna (CC) y la cromatografía de adsorción en placa fina (TLC).
¿Cómo se constituye la fase móvil en CC y TLC?
En ambas técnicas, la fase móvil está constituida por un líquido, mientras que la fase estacionaria por un sólido.
¿Cómo se realiza la separación en CC?
En la cromatografía de adsorción en columna, la fase estacionaria se sitúa en un tubo columna, y los componentes de la muestra son arrastrados por la fase móvil a distintas velocidades.
¿Qué ocurre durante el proceso cromatográfico en CC?
Durante el proceso, los componentes de la muestra son arrastrados por la fase móvil, y la velocidad de arrastre depende de su grado de adsorción en la fase estacionaria y su afinidad por la fase móvil.
¿Qué son algunos adsorbentes comúnmente utilizados en CC?
Algunos adsorbentes comúnmente utilizados son gel de sílice, alúmina, sacarosa y almidón.
¿Qué factores se consideran para seleccionar la fase móvil en CC?
Se selecciona en base a su polaridad con el fin de optimizar la separación de los componentes de la muestra en la columna.
¿Cuáles son los pasos del proceso de cromatografía en columna?
Los pasos son: a) Preparación de la columna, b) Siembra de la muestra, c) Desarrollo (elucción) de la columna.
¿Cómo se prepara la columna en el proceso de CC?
Se prepara una suspensión del adsorbente (fase estacionaria) en el eluyente (fase móvil) y se vierte en el interior de la columna.
¿Cómo se siembra la muestra en CC?
La muestra se deposita en la superficie superior del adsorbente contenido en la columna con la ayuda de una pipeta.
¿Qué ocurre durante la elución de la columna en CC?
Una vez sembrada la muestra, se permite el paso de la fase móvil a través de la fase estacionaria, y se recogen fracciones del eluyente para su análisis.
¿Qué es la cromatografía en capa fina (TLC)?
En TLC, la fase estacionaria se deposita formando una capa delgada sobre un material de soporte, y la fase móvil asciende por capilaridad.
¿Qué es el factor de retardo (Rf) en TLC?
El factor de retardo (Rf) es la relación entre la distancia recorrida por un compuesto y la distancia recorrida por el disolvente en el mismo tiempo.
¿Cuáles son las ventajas de la cromatografía en capa fina (TLC)?
Las ventajas de TLC son su bajo coste, rapidez y sensibilidad.
¿Cuál es el objetivo de la práctica de cromatografía?
El objetivo es elegir el mejor solvente utilizando la cromatografía en capa delgada y separar los diferentes pigmentos fotosintéticos.
¿Qué materiales se necesitan para la práctica de cromatografía?
Se necesitan columna cromatográfica, pipeta de Pasteur, vaso de precipitados, vidrio de reloj, soporte universal, garras, proveta, placa TLC, pinza, tijeras, reactivo de sílice, y solventes (etanol y ácido acético).
¿Cuál es el primer paso en el procedimiento experimental de TLC?
Preparar capilares de vidrio siguiendo las instrucciones del profesor.
¿Cómo se traza la línea de aplicación de muestras en TLC?
Se traza suavemente con una regla y un lápiz a aproximadamente 1 cm del borde inferior de la cromatoplaca.
¿Qué se hace después de depositar las muestras en la cromatoplaca?
Se deja secar el disolvente e introduce la cromatoplaca en la cámara de desarrollo.
¿Cómo se debe manejar la columna durante el proceso cromatográfico?
La columna nunca debe secarse, la fase estacionaria debe estar siempre cubierta por la fase móvil.
¿Qué se hace una vez compactada la columna en CC?
Se procede a sembrar 1 ml de la muestra sobre la superficie de la alúmina con la ayuda de una pipeta.
¿Qué se debe hacer si la pared interna de la columna se ha manchado con la muestra al depositarla?
Se lava dejando gotear por ella un poco del eluyente con la ayuda de la pipeta.
¿Cuál es el objetivo de eluir hasta que el nivel del líquido quede 1 mm por encima de la superficie del adsorbente?
Se eluye de nuevo hasta que el nivel del líquido vuelva a quedar 1 mm por encima de la superficie del adsorbente.
¿Qué se añade después de realizar la elución inicial?
Se añade 1 ml de etanol.
¿Qué se observa a medida que evoluciona el cromatograma con el etanol?
El azul de metileno eluye a lo largo de la columna formando una banda de color azul bien diferenciada que queda retenida en la parte superior de la misma.
¿Dónde queda el naranja de metilo durante el proceso de elución?
El naranja de metilo queda en la parte inferior.
¿Qué se debe hacer si es necesario durante el proceso de elución?
Se añadir más etanol a la columna.
¿Qué se debe hacer cuando el azul de metileno está próximo a la salida de la columna?
Se procederá a recoger fracciones en matraces Erlenmeyer numerados de forma consecutiva.
¿Qué se observa cuando se deja fluir el etanol a través de la columna hasta que la altura de este quede 2 cm por encima de la almina?
Se llena la parte superior libre de la columna de ácido acético.
¿Qué se debe hacer después de llenar la parte superior de la columna con ácido acético?
Abrir la llave de la columna y dejar fluir el agua a través de la almina.
¿Qué se observa al eluir el naranja a lo largo de la columna?
Se forma una banda de color azul bien diferenciada que se desplaza hacia la parte inferior de la misma.
¿Qué se debe hacer cuando el azul está próximo a la salida de la columna?
Se procederá a la recolección de fracciones siguiendo un procedimiento análogo al anterior para el azul de metileno.
¿Qué se presenta en la tabla 1?
Los resultados obtenidos de la cromatografía en capa fina y cromatografía en columna de una muestra de clorofila.
¿Qué colores se asocian con los pigmentos en la muestra de clorofila?
Naranja, azul, verde azulado, verde amarillento, amarillo.
¿Qué solventes se utilizaron en la experiencia de cromatografía?
Etanol y ácido acético.
¿Cómo se calcula el valor de Rf (factor de retención)?
Rf = (distancia que recorre la muestra desde el punto de aplicación) / (distancia que recorre el disolvente hasta el frente del eluyente).
¿Qué indica un coeficiente de retención Rf igual a 1?
Significa que la mezcla llegó al otro extremo y no se separó.
¿Qué significa cuando Rf es igual a 0?
La aplicación no se movió, lo que indica que es muy polar y se debe buscar un disolvente más polar.
¿Qué se observa en la cromatografía de capa delgada respecto a la polaridad de las moléculas?
La molécula que más rápido avanza y más alto llega tiene una polaridad menor, mientras que la que avanza más lento y permanece más cerca de la marca inicial tiene una polaridad mayor.
¿Qué se confirma al observar los valores de Rf para la clorofila con diferentes solventes?
La polaridad del solvente afecta la separación de los compuestos.
¿Cuál es la función de los pigmentos vegetales en las plantas?
Captar energía luminosa durante la fotosíntesis para convertirla en energía química.
¿Cuáles son los principales pigmentos y sus colores asociados?
Clorofila A: verde azulado; clorofila B: verde amarillento; carotenos: naranja; xantofilas: amarillo.
¿Por qué es importante la elección del solvente en la cromatografía?
Porque permite conocer la cantidad de compuestos en la muestra y la polaridad de cada uno.
¿Qué sucede cuando los solutos más polares se adsorben firmemente a los centros activos de la fase estacionaria?
Quedan más retenidos en la fase estacionaria, mientras que los no polares se eluirán con mayor facilidad.
¿Qué se realizó mediante cromatografía líquida en columna en este experimento?
La obtención y separación de los pigmentos naranja y azul de la muestra de clorofila.
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Explora los fundamentos y aplicaciones de la cromatografía, incluyendo técnicas prácticas.
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