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Protein Extraction Enzymes and Folding
Study
1
Question
Quais são os principais métodos de extração de proteínas?
Answer
Condicionalmente não desnaturantes e desnaturantes.
2
Question
Por que a lise de células vegetais e bacterianas requer métodos mais agressivos?
Answer
Devido à parede celular resistente.
3
Question
Qual técnica de lise utiliza o congelamento rápido em nitrogênio líquido?
Answer
Desintegração térmica por vitrificação.
4
Question
Como a centrifugação separa proteínas solúveis de restos celulares?
Answer
Pela sedimentação e centrifugação do homogenato.
5
Question
O que influencia a solubilidade de uma proteína?
Answer
Concentração de sal, polaridade, pH e temperatura.
6
Question
O que é 'salting in' e 'salting out' na solubilidade de proteínas?
Answer
'Salting in' aumenta, 'salting out' precipita a proteína.
7
Question
Como o ponto isoelétrico (pI) afeta a solubilidade de proteínas?
Answer
A solubilidade é mínima no pH igual ao pI, formando agregados insolúveis.
8
Question
Por que é importante manter as proteínas em gelo ou a 4°C durante a purificação?
Answer
Para evitar desnaturação e ação de proteases.
9
Question
Quais métodos de quantificação de proteínas são comuns?
Answer
Cromatografia, biureto, Lowry, Bradford.
10
Question
Como funciona a centrifugação diferencial?
Answer
Separa componentes por diferenças de tamanho e velocidade de sedimentação.
11
Question
Qual a vantagem da centrifugação em gradiente de densidade?
Answer
Permite separação por pequenas diferenças de densidade.
12
Question
O que é a centrifugação zonal isopícnica?
Answer
Separação baseada em densidade, sem depender do tempo.
13
Question
Para que serve a análise por eletroforese?
Answer
Para separar partículas carregadas por campo elétrico.
14
Question
Qual é a condição essencial para a eletroforese de proteínas?
Answer
Presença de tampão e estado iônico das substâncias.
15
Question
Qual a diferença entre eletroforese de frente móvel e de zona?
Answer
Sem suporte versus suporte sólido (géis ou membranas).
16
Question
Como funciona a cromatografia líquida na separação de proteínas?
Answer
Por interações com uma fase estacionária e uma fase móvel.
17
Question
No método de troca iônica, como as proteínas são separadas?
Answer
Pelo afinidade às cargas do permutador na coluna.
18
Question
O que é cromatografia de exclusão molecular?
Answer
Separação por tamanho com base no volume de eluição.
19
Question
Qual o princípio da cromatografia de afinidade?
Answer
Interação específica entre proteína e ligando imobilizado.
20
Question
Como as proteínas hidrofóbicas são eluídas na cromatografia de interação hidrofóbica?
Answer
Gradiente decrescente de sal, começando pela menos hidrofóbica.
21
Question
Qual método químico revolucionário identifica sequências de aminoácidos?
Answer
Degradação de Edman.
22
Question
Por que a espectrometria de massa está substituindo a degradação de Edman?
Answer
Por maior rapidez e capacidade de identificar modificações pós-traducionais.
23
Question
O que é o folding de uma proteína?
Answer
Enrolamento na sua estrutura tridimensional nativa.
24
Question
Quais forças favorecem a estabilidade conformacional de uma proteína?
Answer
Van der Waals, pontes de hidrogênio, interações electrostáticas, efeito hidrófobo e interacções com água.
25
Question
Como a entropia configuracional influencia o folding de proteínas?
Answer
Mais baixa na forma nativa devido à restrição de cadeias laterais.
26
Question
Qual o papel da água na estabilização das proteínas?
Answer
Interagindo favoravelmente com grupos polares e carregados.
27
Question
Como os chaperones auxiliam no folding de proteínas?
Answer
Prevenindo agregação e facilitando o folding correto.
28
Question
Qual a função dos enzimas na biologia?
Answer
Catalisar reações químicas sem alterar o equilíbrio.
29
Question
Por que enzimas são específicas para seus substratos?
Answer
Por afinidade no centro ativo e forma do substrato.
30
Question
Como os enzimas aceleram as reações?
Answer
Diminuindo a barreira de energia de ativação.